显微镜进行原生质体的分离、融合与培养

显微镜进行原生质体的分离、融合与培养

显微镜进行原生质体的分离、融合与培养
内    容：
一、实验目的
掌握用聚乙二醇法诱导同种植物原生质体融合技术，用显微镜并鉴别杂种细胞。
二、实验原理
  不同植物的原生质体可在人工诱导条件下融合。所产生的杂种细胞，即异核体，经过培养可再生新壁，分裂成愈伤组织，进而分化产生杂种植株。由于进行融合的原生质体来自体细胞，故该项技术也叫体细胞杂交。原生质体融合能使有性杂交不亲合的植物物种间进行广泛的遗传重组，因而在农业育种上具有巨大的潜力。在植物遗传操作研究中也是关键技术之一。
三、试剂与器材
1.材料 烟草或其它植物无菌苗的叶片   胡萝卜肉质根诱导的松软愈伤组织或悬浮培养细胞
2.试剂 酶液及洗涤液 PEG液  高pH高钙稀释液 DPD培养基
3.实验器材镊子解剖刀剪 接种针 铝饭盒 恒温培养箱锡箔纸 记号笔 橡皮筋 试剂瓶 三角瓶移液管 培养皿 酒精灯 超净工作台 灭菌锅 倒置显微镜
四、实验内容
原生质体分离、收集→将两种原生质体等量混合→在培养皿底形成一层→加入聚乙二醇→加入稀释液→吸去→再加入→用DPD培养基换洗二次→平皿中加培养基26℃下暗培养→弱光下培养→观察融合。
五、关键步骤及注意事项
1. 清洗时注意勿使原生质体浮起。