生物倒置显微镜进行动物细胞培养

生物倒置显微镜进行动物细胞培养

生物倒置显微镜进行动物细胞培养
内    容：
一、实验目的
利用倒置生物显微镜通过本实验了解原代细胞与传代细胞培养的基本方法以及在细胞培养过程中严格的操作程序。
初步掌握无菌操作的基本原则，认识无菌操作在细胞培养中的重要性。
二、实验原理
  原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官）经消化，分散成为单个游离的细胞，在人工培养下，使其不断的生长及繁殖。
细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。要使细胞能在体外生长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。二是严格控制无菌操作。
三、试剂与器材
1.材料 出生后2-3天的乳鼠
2.试剂 平衡盐液－Hank液  细胞消化液 0.5%水解乳蛋白-Hank液  犊牛血清  碳酸氢钠 1万单位/ml青、链霉素 3%谷氨酰胺  磷酸盐缓冲液
3.实验器材 镊子 解剖刀剪 眼科剪 眼科镊纱布块 玻璃漏斗 量筒 记号笔 试管 试剂瓶三角瓶 移液管 培养皿 培养瓶 吸管 橡皮头 显微镜 血细胞计数板 计数器 酒精灯酒精棉球 试管架 试管解剖板 碘酒棉球口罩 二氧化碳培养箱 超净工作台灭菌锅 倒置显微镜
四、实验内容
原代培养：取肾→消化分散组织→计数与稀释→分装培养→观察。
传代培养：配置培养液→消化细胞→细胞计数→培养观察。
培养细胞冷冻保存。
五、关键步骤及注意事项
1. 注意无菌操作，及时更换培养液。
六、思考题
1. 简述细胞传代培养的操作程序注意事项？
2. 细胞培养获得成功的关键要素是什么？
3. 简述体外培养细胞的形态特征及其生长阶段