用显微镜做细菌形态观察及单染色

用显微镜做细菌形态观察及单染色

用显微镜做细菌形态观察及单染色                     
实验类型：基础
内    容：
一、实验目的
1.了解简单染色法的原理，并掌握其操作方法。
2.学习并掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术。
3.巩固显微镜(油镜)的使用方法。(油镜的使用方法)
4.初步认识细菌的形态特征。
二、实验原理
    细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色，与背景形成鲜明的对比，以便在生物显微镜下进行观察。根据实验目的不同，可分为简单染色法、鉴别染色法和特殊染色法等。简单染色法是最基本的染色方法，是利用单一染料对细菌进行染色。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色。
三、试剂与器材
 1.材料 大肠杆菌，枯草芽孢杆菌
 2.试剂 吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)、齐氏石炭酸复红染液。
 3.器材 微生物显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)等。
四、实验内容
简单染色法：涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检
五、关键步骤及注意事项
1.涂片时，生理盐水及取菌不宜过多，涂片应尽可能均匀，
2.水洗步骤水流不宜过大，过急，以免涂片薄膜脱落。
六、思考题
1.你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪些环币?
2.为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察?
3.如果你的涂片未经热固定，将会出现什么问题?如果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢?