用生物显微镜线粒体、液泡系的活体染色实验

用生物显微镜线粒体、液泡系的活体染色实验

用生物显微镜线粒体、液泡系的活体染色实验
内    容：
一、实验目的
活体染色是细胞器活体观察的一种重要手段，常见有中性红染液泡系、Janus green B染线粒体。通过本实验学会活体染色的方法。

二、实验原理
    活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
    根据所用染色剂的性质和染色方法不同，通常把活体染色分为体内活染和体外活染两类。体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
    活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，他们彼此就发生了吸引作用。但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，Janus green B和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。

三、试剂与器材
 1.材料:小白鼠肝细胞、人口腔上皮细胞 、洋葱鳞茎内表皮细胞、小麦或黄豆幼根根尖
 2.试剂:Ringer溶液、10%、1/3000中性红溶液 1%、1/5000Janus green B溶液
 3.实验器材：双目生物显微镜、载波片、盖波片、刀片、吸水纸镜头纸、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、表面皿牙签凹面载玻片

四、实验内容
动、植物活细胞→中性红染10分钟→吸干染料→换上Ringer氏液→制片观察。
动、植物活细胞→Janus green B染30分钟→吸干染料→换Ringer氏
液→制片观察。

五、关键步骤及注意事项
 1. 注意Janus green B染色时，应让组织露在空气中以保持呼吸正常。

六、思考题
1. 用一种活体染色剂对细胞进行超活染色，为什么不能同时观察到线粒体、液泡系等多种细胞器？
2.  小麦或黄豆根尖经中性红超活染色，为什么看到生长点的细胞中液泡多，而且染色深，延长区细胞中液泡数量变少，染色浅？