用显微镜进行花粉活力的测定

用显微镜进行花粉活力的测定

用显微镜进行花粉活力的测定
实验类型：基础

内    容：
一、实验目的
1.学习用碘-碘化钾染色测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。
2.学习用过氧化物酶测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。
3.学习用氯化三苯基四氮唑法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。

二、实验原理
（一）碘一碘化钾染色测定法
    水稻正常花粉呈圆球形，并积累淀粉较多，通常可用I-KI染成蓝色；发育不良的花粉常呈畸形，不积累淀粉，用I-KI染色，不呈蓝色，而呈黄褐色。

（二）过氧化物酶测定法
具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉有无活性。

（三）氯化三苯基四氮唑法(TTC法)
2、3、5-氯化三苯基四氮唑(TTC)的氧化状态是无色的，被氢还原时成红色的TTF。
具有生命力的种子，由于呼吸作用产生的氢能使TTC还原成TTF，因此胚部便染成红色；而无生命的种子没有呼吸代谢活力，TTC不被还原，因而胚部不着色。所以，可根据种子胚部染不染成红色来判断种子有无生命力，从而测定种子发芽率。

三、试剂与器材
1.   材料:水稻花粉
2.   试剂:
(1)I-KI溶液
(2) 0.5％联苯胺：将0.5g联苯胺溶于100m150％乙醇中。
(3)0.5％a一萘酚：将0.5ga一萘酚溶于100ml 50％乙醇中。
(4)0.25％碳酸钠：将0.25g碳酸钠溶于100ml蒸馏水中。
(5)0.3％过氧化氢，即试剂Ⅱ。
(6)试剂I：由0.5％联苯胺、0.5％a一萘酚和0.25％碳酸钠溶液各10ml混合配成。
(7)0.5％TTC溶液。
3.器材：生物显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、恒温箱。

四、操作方法
1.花粉采集、置载玻片上、滴加试剂
2.显微镜镜检、观察
3.计算

五、关键步骤与注意事项
1、四氮唑液最好现配现用，如要贮存必须放在棕色瓶中，并放在阴凉黑暗处。
2、花粉采集时期要适宜，取充分成熟将要开花的花朵带回室内，取其内部的花粉。
 
六、思考题
1.用3种方法统计不同植物的花粉活力百分率。
2.试比较用3种方法测定的同一花粉的活力百分率是否相同，分析其原因。